標簽: 微生物學

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分享水產養殖中弧菌的分離檢測(TCBS培養基與弧菌顯色培養基）: flyjet 2016-7-12 23:40; 水產養殖中弧菌的分離檢測 (TCBS 培養基與弧菌顯色培養基） TCBS 培養基分離弧菌國標 GB4789.7-2013 食品微生物學檢測副溶血性弧菌檢測中硫代硫酸鹽 - 檸檬酸鹽 - 膽鹽 - 蔗糖（ TCBS ）瓊脂配方：酵母膏粉 5g ，蛋白胨 10g ，氯化鈉 10g ，檸檬酸鈉 10g ，硫代硫酸鈉 10g ，膽酸鈉 3g ，牛膽粉 5g ，蔗糖 20g ，檸檬酸鐵 1g ，瓊脂 15g ，溴麝香草酚蘭 0.04g ，麝香草酚蘭 0.04g 最終 pH 8.6 ± 0.2 TCBS 瓊脂的原理就是發現蔗糖發酵產生酸的菌落，霍亂陽性，副溶血性弧菌陰性，副溶血性弧菌不發酵蔗糖，菌落呈藍綠色。霍亂弧菌發酵蔗糖產酸，菌落呈黃色。然后，這些有機酸，也被這種細菌利用，分解成二氧化碳揮發了，有機酸沒有了，菌落就重新變成綠色的了。該培養基中的牛膽粉有抑制其他革蘭氏陽性菌的作用，與枸櫞酸鈉和硫代硫酸鈉合用時，對大腸桿菌有明顯抑制作用。同時枸櫞酸鈉和枸櫞酸鐵可使霍亂弧菌免受其他抑菌劑的作用，加之有營養豐富的酵母浸粉，霍亂弧菌又能利用蔗糖分解產酸，所以菌落較大，且呈黃色。大腸桿菌等雜菌菌落較小或不生長，故易識別。黃色菌落只要是利用培養基中的蔗糖產酸，菌落就是黃色的，像溶澡弧菌、河流弧菌、麥氏弧菌、等要本培養基上均為黃色菌落，并不是黃色菌落就是霍亂弧菌。樣品中常常存在大量可以發酵蔗糖的干擾細菌，常常會碰到整個平板會變黃色的現象。另：霍亂弧菌一旦檢出要立即送有關部門，普通實驗室是不準保存的！！黑色：細菌分解含硫物質產生硫化氫同時與培養基中的含鐵物質反應 , 從而產生黑色的菌落 . 以上內容來源于食品伙伴網選用 TCBS 作為分離培養各種弧菌的培養基，其特異性不是很強；不少細菌在 TCBS 上也能生長，當生長較慢，需培養 24h 后方可長成 0.5~1mm 的黃，綠色菌落。為有效排除干擾，及時準確地判別出是否存在弧菌屬細菌，可結合弧菌屬細菌在 TCBS 培養基上生長的特點：弧菌生長快，菌落大，培養 4~5h 原劃線處有菌苔生長， 8~10h 可長出小菌落， 16h 菌落可達 2mm; 其他細菌在 TCBS 上無此特點。因此，在篩選弧菌屬細菌的選擇性培養基時要特別注意在確定的培養時間內進行菌落的觀察，時間超過即影響其準確性。以上表 2 及文字節選自浙江工商大學趙廣英等人論文《水產品中多種致病性弧菌的分離鑒定》。弧菌顯色培養基原理：目標菌在該培養基上生長，代謝產生特異性的酶與酶底物作用，底物經酶水解作用釋放顯色基團使菌落顯色。霍亂弧菌、擬態弧菌在該培養基上生長菌落呈（淡）藍綠色，副溶血性弧菌在該培養基上生長菌落呈紫紅色。使用方法：按說明書使用量（不同廠家重量略有不同）稱取培養基于 1L 蒸餾水或去離子水（可根據實驗實際需要配比加水）；充分混勻，加熱并不斷攪拌至完全溶解，煮沸約 2min; 滅菌后的培養基冷卻至 50 攝氏度時，鋪平板，待培養基完全凝固后使用。使用前儲存于暗處。劃線接種后于 37 ℃ 培養 24 小時。保存：干粉培養基于 30 ℃以下陰涼干燥處存放，制備好的平板于 2-8 ℃避光，可保存一周。說明： 1 、同類產品存在不同配方，或采用不同的顯色劑，因此菌落形成的顏色不同。 2 、副溶血性弧菌在該顯色培養基上呈現紫紅色菌落；注意：本培養基中含有的成分對人體有毒害作用，使用時請做好防護措施，避免與眼睛、皮膚接觸，避免吸入或吞食。目前有進口科瑪嘉弧菌顯色培養基（干粉），國產陸橋弧菌顯色培養基（干粉），陸橋有新推出弧菌顯色培養基平板等產品。按照國標方法配置的 TCBS 培養基價格比價便宜�；【@色培養基價格相對 TCBS 比較貴。一塊弧菌顯色培養基成本大約要十幾塊，對于蝦農來說是一筆不小的開支。不過弧菌顯色培養基對于副溶血弧菌等目標菌的分離效果要好于 TCBS 培養基，開發殺弧菌藥品，噬弧菌等的公司可以用來驗證藥品殺弧菌，特別是殺副溶血性弧菌的驗證。市面上水產用的 TCBS 培養基如果按照國標 GB4789.7 TCBS 配方生產的產品，也就是常用的黃弧菌，綠弧菌培養基，可能實際上對弧菌的分離效果并不明顯，國標 4789.7 是食品行業的標準，在檢出目標菌后一般還有進一步生化鑒定，以確定是哪類弧菌。但蝦農并不具備進一步實驗的技術和能力，只能根據肉眼判斷黃弧菌或者綠弧菌，而無法得知是否是導致蝦病的致病弧菌。弧菌顯色培養基可以區分副溶血弧菌及其他幾種致病菌，對于殺弧菌產品的藥品公司有一定針對性，至少可以驗證殺弧菌前后幾類致病弧菌的數量驗證殺弧菌效果。; 0 個評論

分享光合細菌: 小清哥 2015-12-30 09:44; 從微生物學的角度上講，光合細菌（簡稱PSB）是一大類能進行光合作用的原核生物的總稱，分為產氧光合細菌和不產氧光合細菌兩大類。產氧光合細菌主要是藍細菌，或稱之為藍藻和原綠藻，在分類上屬于藻類。　　　　這里所說的光合細菌是能在厭氧光照條件下進行不產氧的光合作用的原核生物。分為4個科：紅螺菌科、著色菌科、綠菌科和綠曲菌科。主要特征：含有光合色素——菌綠素；在厭氧、光照條件下進行光合生長，且不產氧。　　　　市場上見到的光合細菌劑型大致有液體制劑、濃縮液、固體制劑、凍干粉等。相對而言，液體制劑較容易大量培養和批量生產，且培養物的活性較強，光合細菌的代謝物含量豐富。應用效果也較好，目前在各劑型中是使用量最大的一種。　　　　在水產養殖中運用的光合細菌主要是光能異養型、紅螺菌科中的一些品種，我們主要介紹沼澤紅假單胞菌。根據農業部1126號公告（2008），準許沼澤紅假單胞菌以飼料添加劑的方式使用于養殖動物。　　　　沼澤紅假單胞菌生長的適宜水溫15—40℃,最適水溫為30—36℃。是兼性厭氧菌，是革蘭氏陰性菌，以小分子有機物、二氧化碳等作碳源，以氨、銨鹽、硝酸鹽或亞硝酸鹽作氮源。菌體蛋白質含量高，并含有大量促進魚蝦生長的活性因子，如生物素、維生素、β-類胡蘿卜素等，可明顯促進養殖生物的生長發育，縮短養殖周期。并具有適應性強，能耐受高濃度的有機廢水和較強的分解轉化能力，對酚、氰等毒物也有一定的耐受和分解能力等特點。　　　　一、功能　　　　1.凈化水質：沼澤紅假單胞菌可降解水體中的有機物；同時，還能吸收利用水體中的氨、亞硝酸鹽、硫化氫等有害物質。在處理生活污水時，每天連續大量在污染水體中投放沼澤紅假單胞菌，消耗大量氮、磷等營養因子，會抑制浮游植物的生長。　　　　2.作為飼料添加劑：沼澤紅假單胞菌具有很高的營養價值，這正是它在水產養殖中作為培水餌料及作為飼料添加成分物質基礎。　　　　3.抑制藍藻水華：沼澤紅假單胞菌能大量利用水中的某些藍藻需要的有機物質，和藍藻形成生物競爭，在藍藻水華產生初期能有效抑制藍藻數量。　　　　二．制備方法　　　　生產所需設備：　　　　1、容積60L的白色塑料桶、漏斗、塑料勺（一級擴培）；　　　　2、容積1噸的塑料罐，白色半透明為宜（二級擴培）；　　　　3、功率不超過100瓦（一般采用75瓦）的潛水泵；　　　　4、容積5L的透明塑料瓶若干。　　　　一級擴培：將2瓶紅色5升菌種和2袋500克定向培養基、100克膏狀培養基、1號瓶黃色液體培養基和90升自來水或井水混合均勻后再灌裝到20個5升的透明塑料瓶中，晴天曬5天左右（陰雨天或最高氣溫低于20℃時間需要延長，最低氣溫不得低于15度），每天早8時左右搖動一次防止活菌沉淀，即可得到與菌種顏色和濃度一致的一級菌種。　　　　二級擴培：將得到的20瓶一級菌種、2袋5kg定向培養基、1kg膏狀培養基、2號瓶黃色液體培養基和900升自來水或井水混合均勻后再灌裝到200個5升的透明塑料瓶中，晴天曬5天左右（陰雨天氣時間需要延長），每天早8時左右搖動一次防止活菌沉淀，即可得到與菌種顏色和濃度一致的成品。　　　　注意：高溫季節正午時需要在瓶體外覆蓋遮陽網和灑水降溫，保證菌液溫度不超過45度，防止菌種被高溫及強紫外線殺死。　　　　罐體內部消毒步驟：　　　　1、使用增壓水槍沖洗附著物（自來水或井水）；　　　　2、放掉臟水，再次加入自來水或井水（需要覆蓋出水口上方），加入適量二氧化氯消毒劑，浸泡、熏蒸10-30分鐘（加蓋）；　　　　3、放掉消毒水，關掉出水閥門，使用自來水或井水由上至下沖洗罐體，使蓄水量覆蓋出水口上方后全部放掉，完成消毒過程。　　　　4、如果不間斷連續生產沼澤紅假單胞菌，則期間無需反復消毒。　　　　三、科學的使用　　　　1.用量用法：　　　　沼澤紅假單胞菌的最宜使用時間應該盡量在天亮后盡早使用，以最大限度的利用光照，充分發揮其功能。使用于養殖池塘時，700ml（按含沼澤紅假單胞菌100億個/ml的產品計算）用于1畝水面（不計水深）；用水稀釋后均勻潑灑。大型水體可以和畜禽糞尿水同時潑灑。　　　　沼澤紅假單胞菌作為飼料添加劑使用時，可將菌液噴灑于飼料中拌勻即可，菌液用量為投喂飼料量的1-2%，現配現用。　　　　2.使用條件：　　　　一般來說，水溫達到15攝氏度或以上，天氣晴朗時使用最適宜。水體過肥時、早中晚水色無明顯變化的水體、底層水有腥臭味時、出現藻類水華早期癥狀時，視情況使用1-2次沼澤紅假單胞菌；藍藻水華爆發嚴重的水體在使用沼澤紅假單胞菌的同時還需要視具體情況配合使用高水溶性的過磷酸鈣。　　　　注意事項：使用沼澤紅假單胞菌的前后三天內盡量不要使用消毒劑和殺蟲劑; 個人分類: 對蝦養殖菌類|2038 次閱讀|0 個評論