文/圖 廣州利洋水產科技股份有限公司 譚鮮英 張文文 戚瑞榮 煙臺大學陳營 在筆者團隊的檢測中，共發現6個PirAB型副溶血弧菌的分離菌株對所有試驗藥物產品均不敏感，即俗稱的超級細菌。雖然出現的數量少，但在對蝦疾病的防治中應給予足夠的重視，否則一旦發病或蔓延擴散，將沒有抗生素類產品可用 利洋公司自2014年開始進行對蝦致病性副溶血弧菌的流行病學調查、病原菌的分離、PirAB毒素基因的PCR檢測、毒力菌株的藥敏試驗等，為對蝦的養殖生產實踐提供了科學的理論指導。在我們的檢測中，共發現6個PirAB-Vp分離菌株對所有試驗藥物產品均不敏感，即我們俗稱的超級細菌。雖然出現的數量少，但在對蝦疾病的防治中應給予足夠的重視，否則一旦發病或蔓延擴散，將沒有抗生素類產品可用。 一、材料和方法 1、病蝦和水樣的采集 在養殖南美白對蝦發病時，采集病蝦的肝胰腺的和水樣，接種TCBS平板。然后，送利洋公司研究所進行PirA毒素基因的PCR檢測，并對陽性菌株做藥敏試驗分析。 2、病蝦和水體的PirAB-Vp檢測 挑取TCBS平板上的單菌落或轉接的過夜培養物，煮沸制備細菌基因組模板，采用PCR方法進行副溶血弧菌和PirA毒素基因的檢測。 3、藥敏試驗 對經過PCR檢測陽性的PirAB-Vp菌株，采用紙片法進行藥敏試驗，通過測量濾紙片周圍出現的抑菌圈的大小，衡量其對所試藥物的敏感程度。所試藥物為公司的9種抗生素類產品，通過實驗確定適當的藥物濃度并自行制備藥敏紙片，抑菌圈直徑d≦14mm即為不敏感或耐藥。 二、結果 1、對蝦PirAB-Vp菌株中水產超級細菌的發現 今年二季度，從對蝦肝胰腺和養殖水體中共檢出261株PirAB-Vp，對其中的108株分離菌進行了藥敏試驗分析，共發現6株菌對全部所試藥物（產品）不敏感或耐藥，表現為完全的耐藥性，見表1。對蝦PirAB-Vp分離菌株對常用的水產藥物均耐藥，呈現水產超級細菌的特征。在抑菌圈里生長的稀疏菌落，是典型耐藥菌株的表現，見圖1a。而同時從采集的樣本中分離的對照菌株，在藥敏試驗中出現清晰的抑菌圈，見圖1b。 2、對蝦PirAB-Vp毒力與耐藥性之間的關系 在江蘇、海南、廣東三個地區的PirAB-Vp分離菌株中，均發現超級耐藥的水產副溶血弧菌，而且肝胰腺和水體都有超級耐藥菌株分離。經pirA毒素基因檢測，本文中6株全部耐藥的菌株均為攜帶PirAB毒素基因的副溶血弧菌，即PirAB-Vp菌株。在二季度我們共檢出261株PirAB-Vp，同時也檢出45株攜帶PirAB毒素基因的非副溶血弧菌。但未在PirAB非副溶血弧菌和不攜帶PirAB毒素基因的對蝦弧菌中發現全部耐藥的超級細菌，見表2。 三、討論 1、對蝦PirAB副溶血弧菌超級細菌出現的意義 對蝦致病性副溶血弧菌是一個特殊的菌株，完全不同于從臨床上和環境中分離的菌株，相關的藥敏試驗分析報道很少。在的日常檢測中，我們發現了6株對多種水產常用抗生素完全耐藥的PirAB-Vp菌株，即水產超級細菌。如果這樣的菌株引起對蝦發病或在水產養殖系統中大量繁殖，將沒有可用的藥物去控制和治療。雖然發現超級細菌的數量少，但涵蓋廣東、海南、江蘇三個地區，這樣生態上的廣范分布，可能會預示今后其出現的幾率更大、范圍更廣，隨之帶來的生物安保防控問題也會加大。提示我們在今后對蝦疾病的防控中，要注意內外兼顧，科學施治，切斷病原菌流行和傳播的途徑，控制疾病的發生和發展。 2、對蝦PirAB副溶血弧菌耐藥性產生的機制 細菌的耐藥性多由質粒攜帶，在環境不利條件脅迫時，耐藥質粒在群體間加速轉移，使得耐藥菌株被選擇出來而成為群落中的優勢種群。而多個耐藥質�；蚧蛲瑫r出現在一個菌株的細胞內，這可能是出現超級細菌的主要原因。其次，因為每種藥物的殺菌機制及菌株的耐藥機制均不相同，同時出現對所有藥物耐藥的幾率極低。但如果細菌的某些通用機制發生改變，如細菌細胞膜上負責轉運藥物的外排通道開啟，使得藥物不能進入細胞內發揮作用，會造成對所有試驗藥物均不敏感，這個機制更有可能是超級細菌出現的原因。 關于耐藥菌株的來源，目前還不清楚。推斷池塘底泥中、附著物上、水生生物體內都可能是耐藥菌株的來源，進而通過水體、附著物、水生生物傳播，造成超級細菌的流行和擴散。 3、對蝦PirAB副溶血弧菌毒力與耐藥性之間的關系 毒力和耐藥的出現往往具有相關性，兩者多由質粒攜帶，受環境壓力的脅迫，質粒在細菌群落中出現轉移，帶有毒力的菌株往往同時帶有耐藥性，使其在生態系統中具有競爭的優勢，更容易侵入宿主體內而致病。最新的研究證實，PirAB-Vp攜帶一個約69kb的大質粒，在質粒上有兩個與昆蟲致病相關的毒素基因PirA和PirB，它們分別編碼一個13kDa和50kDa的外毒素蛋白并分泌到周圍環境中。我們的檢測發現，完全耐藥菌株只在PirAB-Vp中出現，未在PirAB非副溶血弧菌和不攜帶pirAB毒素基因的弧菌中發現。雖然，對蝦PirAB-Vp中出現超級細菌的機制尚不能明確。但是，可以確定PirAB-Vp中出現多種耐藥的超級細菌與其攜帶的毒力基因大質粒有一定的相關性。而且，兩者之間是否存在必然的聯系值得進一步研究。  【關鍵字】：PirAB型 副溶血弧菌 超級細菌 對蝦 養殖業 災難 水產養殖 |
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